細(xì)胞支原體污染：多重因素交織的“隱形危機(jī)”  

細(xì)胞支原體污染核心的影響因素解析  

細(xì)胞支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中的常見難題，其發(fā)生與傳播受多重因素影響，主要可分為以下四大類：  

1.操作與人為因素  

無菌操作疏漏  

未規(guī)范使用生物安全柜、未佩戴手套/口罩，或操作時頻繁走動導(dǎo)致氣流擾動，增加支原體懸浮顆粒吸入風(fēng)險(xiǎn)。  

案例：某實(shí)驗(yàn)室因未及時更換培養(yǎng)箱水盤，導(dǎo)致支原體通過氣溶膠傳播至多個細(xì)胞系。  

交叉污染風(fēng)險(xiǎn)  

共用培養(yǎng)基、移液器或細(xì)胞培養(yǎng)瓶，未消毒實(shí)驗(yàn)器具（如酸浸泡不足或高壓滅菌不完全）。  

數(shù)據(jù)：交叉污染是支原體污染的首要原因，占比超60%。  

細(xì)胞來源隱患  

引入未檢測的污染細(xì)胞系，或使用未經(jīng)驗(yàn)證的血清、培養(yǎng)基。  

案例：某研究團(tuán)隊(duì)因使用第三方提供的污染細(xì)胞，導(dǎo)致整個實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞系集體“淪陷”。  

2.環(huán)境與設(shè)備因素  

培養(yǎng)環(huán)境失控  

培養(yǎng)箱濕度過高（>80%）或溫度波動（±1℃以上），促進(jìn)支原體繁殖；CO?濃度異常（如>6%）影響細(xì)胞代謝，降低抵抗力。  

數(shù)據(jù)：支原體在37℃、5%CO?、95%濕度環(huán)境下繁殖速度最快。  

設(shè)備清潔不足  

生物安全柜濾膜未定期更換（建議每6-12個月更換），或培養(yǎng)箱內(nèi)壁、水盤未定期清潔消毒（推薦使用70%乙醇或含氯消毒劑）。  

案例：某實(shí)驗(yàn)室因培養(yǎng)箱水盤長期未清潔，滋生支原體并擴(kuò)散至全部細(xì)胞。  

氣溶膠傳播  

離心、振蕩或開蓋操作時產(chǎn)生氣溶膠，支原體可懸浮于空氣中數(shù)小時，通過氣流擴(kuò)散至其他培養(yǎng)區(qū)域。  

防護(hù)建議：在生物安全柜內(nèi)操作，離心后靜置5分鐘再開蓋。  

3.試劑與耗材因素  

血清質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)  

使用未滅活支原體或支原體檢測陰性的血清（如胎牛血清需通過PCR或培養(yǎng)法檢測）。  

數(shù)據(jù)：劣質(zhì)血清是支原體污染的第二大來源，占比約25%。  

培養(yǎng)基污染  

培養(yǎng)基配制過程中未過濾除菌（如使用0.22μm濾膜），或儲存條件不當(dāng)（如4℃超過1個月）。  

案例：某團(tuán)隊(duì)因自行配制培養(yǎng)基未嚴(yán)格無菌操作，導(dǎo)致支原體污染率飆升至40%。  

耗材交叉使用  

重復(fù)使用培養(yǎng)瓶、移液管或離心管，或未區(qū)分清潔區(qū)與污染區(qū)（如將污染細(xì)胞的處理工具用于健康細(xì)胞）。  

規(guī)范：一次性耗材嚴(yán)禁重復(fù)使用，實(shí)驗(yàn)器具需專用并標(biāo)記。  

4.細(xì)胞自身因素  

細(xì)胞類型易感性  

貼壁細(xì)胞比懸浮細(xì)胞更易感染支原體，因貼壁生長增加接觸污染源的機(jī)會。  

數(shù)據(jù)：貼壁細(xì)胞的支原體污染率是懸浮細(xì)胞的2-3倍。  

細(xì)胞狀態(tài)脆弱性  

細(xì)胞密度過高（>90%匯合度）或傳代次數(shù)過多（>30代），導(dǎo)致代謝廢物積累、抵抗力下降。  

案例：某團(tuán)隊(duì)因細(xì)胞過度傳代，支原體污染后細(xì)胞死亡率高達(dá)80%。  

缺乏抗生素保護(hù)  

未在培養(yǎng)基中添加支原體抑制抗生素，或抗生素濃度不足（如慶大霉素需50μg/mL）。  

爭議：長期使用抗生素可能掩蓋污染癥狀，但短期可降低污染風(fēng)險(xiǎn)。