細(xì)胞培養(yǎng)是生物科研基礎(chǔ)核心操作，新手常因細(xì)節(jié)疏漏導(dǎo)致細(xì)胞污染、狀態(tài)異常，不僅浪費(fèi)樣本與時(shí)間，更會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。結(jié)合實(shí)操經(jīng)驗(yàn)，梳理新手高頻踩坑點(diǎn)及規(guī)避方法，幫大家快速建立規(guī)范操作邏輯，保障細(xì)胞培養(yǎng)穩(wěn)定性。

無(wú)菌操作：細(xì)節(jié)失守=污染高發(fā)，這些誤區(qū)別踩

無(wú)菌環(huán)境是細(xì)胞培養(yǎng)的核心前提，新手常因操作不規(guī)范引發(fā)細(xì)菌、真菌、支原體污染，多數(shù)問題源于細(xì)節(jié)疏忽：

1. 超凈臺(tái)使用：開機(jī)后需紫外線消毒30分鐘以上，消毒后等待紫外線關(guān)閉、通風(fēng)片刻再操作，避免紫外線殘留損傷細(xì)胞；操作時(shí)手臂需在超凈臺(tái)內(nèi)指定區(qū)域活動(dòng)，避免跨越無(wú)菌區(qū)，實(shí)驗(yàn)用品擺放有序，不堆積雜物遮擋氣流，同時(shí)保持超凈臺(tái)內(nèi)定期清潔，及時(shí)清理廢液與殘留試劑。

2. 實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范：接種、傳代、換液時(shí)，試劑瓶口、培養(yǎng)瓶瓶口需經(jīng)酒精燈外焰滅菌，滅菌后避免瓶口接觸非無(wú)菌表面（如桌面、手套外側(cè)）；吸液時(shí)使用一次性移液槍頭，不同試劑、不同細(xì)胞的槍頭不可混用，避免交叉污染；胰酶消化細(xì)胞時(shí)，需根據(jù)細(xì)胞類型控制消化時(shí)間，觀察到細(xì)胞間隙變大、貼壁松動(dòng)即可終止消化，避免消化過度損傷細(xì)胞膜。

3. 環(huán)境與人員防護(hù)：操作時(shí)穿戴無(wú)菌手套、口罩、實(shí)驗(yàn)服，手套破損后及時(shí)更換；實(shí)驗(yàn)室定期通風(fēng)、滅菌，避免與微生物實(shí)驗(yàn)區(qū)域交叉使用；細(xì)胞培養(yǎng)箱需定期清潔消毒，控制好溫度、濕度與CO?濃度，定期檢查水箱水質(zhì)，避免水箱污染引發(fā)培養(yǎng)環(huán)境變質(zhì)。