我國藥典中規(guī)定，新生牛血清是從出生14小時內(nèi)未進食的新生牛采血分離血清，經(jīng)除菌過濾后制成。牛血清生產(chǎn)過程中不得任意添加其他物質(zhì)成分。新生牛血清應進行以下檢查，符合規(guī)定后方可使用。

如釆用經(jīng)過驗證的病毒滅活工藝處理的牛血清，大腸埃希菌噬菌體及病毒檢測必須在滅活前取樣進行。

pH值：應為7.00~8.50。

蛋白質(zhì)含量：采用雙縮脲法（通則0731第三法）或其他適宜方法測定，應為35~50g/L。

血紅蛋白：用分光光度法或其他適宜的方法測定，應不高于200mg/L。

滲透壓摩爾濃度：應為250~330mOsmol/kg（通則0632）。

細菌內(nèi)毒素檢查：應不高于10EU/ml（通則1143凝膠限度試驗）。

支持細胞增殖檢查：采用傳代細胞（HFL1、Mv1 Lu、Vero和CHO）中的任意1種細胞及Sp2/0-Ag14細胞進行。細胞復蘇后，用待測樣品配制的培養(yǎng)液至少連續(xù)傳3代后使用，取對數(shù)生長期的細胞用于試驗。

（1）細胞生長曲線的測定  取供試品按10%濃度配制細胞培養(yǎng)液，Sp2/0-Ag14按每1ml含1×10^4的細胞濃度，其他貼壁細胞按2×104的細胞濃度接種細胞，每天計數(shù)活細胞，連續(xù)觀察1周，并繪制生長曲線。

（2）細胞倍增時間的測定  按生長曲線計算細胞的倍增時間。取細胞峰值前一天的細胞計數(shù)（Y）、接種細胞數(shù)（X）及生長時間（T）計算。

Sp2/0-Ag14細胞應不超過20小時；HFL1細胞應不超過22小時；Mv1 Lu細胞應不超過24小時；Vero細胞應不超過18小時；CHO細胞應不超過22小時。

（3）克隆率的測定  將細胞稀釋至每1ml含10個活細胞的濃度，按每孔1個細胞接種于96孔細胞培養(yǎng)板，每板至少接種60孔，于37℃、5%二氧化碳培養(yǎng)，定期觀察細胞克隆生長情況，培養(yǎng)1周后計數(shù)每孔中的細胞克隆數(shù)，并計算克隆率，應不低于70%。

無菌檢查：依法則檢查（通則1101），應符合規(guī)定。

支原體檢查：依法則檢查（通則3301），應符合規(guī)定。

大腸埃希菌噬菌體：采用噬斑法和增殖法檢測。不得有噬菌體污染。

病毒檢查：

（1）樣品制備　取約250ml的新生牛血清供試品用于檢測，將其配制成含15%供試品的培養(yǎng)液，用于檢測全過程的細胞換液及傳代，以檢測合格的血清作為陰性對照血清。

（2）指示細胞制備　至少采用猴源（如Vero細胞）、2種牛源細胞（BT和MDBK細胞或無病毒污染的原代牛腎細胞）以及人二倍體細胞作為指示細胞，細胞復蘇后至少傳代1次后使用，根據(jù)所需量制備足夠量的細胞。

（3）用含有供試品的培養(yǎng)液將4種指示細胞分別接種于75cm2細胞培養(yǎng)瓶中，接種量應使細胞在培養(yǎng)7天后可達到至少80%～90%匯合。同時制備陰性對照血清培養(yǎng)瓶。將培養(yǎng)瓶置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至少7天?？稍诘?span>5天時換液一次。

（4）第7天進行第1次盲傳，將接種供試品及陰性對照的每種指示細胞培養(yǎng)瓶分別傳出至少2個75cm2培養(yǎng)瓶，繼續(xù)培養(yǎng)至第14天，在第12天時可換液一次。

（5）在第13天時（或第2次傳代前1天）或陰性對照瓶細胞達到至少70%匯合時，制備陽性對照用細胞。即取1個陰性對照細胞瓶分別傳至6孔板或其他適宜的細胞板中用于細胞病變觀察（CPE）、血吸附檢查（HAd）及熒光抗體檢測（IF），次日接種陽性對照病毒。

（6）第14天時進行第2次盲傳。將第1次傳代后的細胞培養(yǎng)物分別傳至6孔板或其他適宜的細胞板中，進行細胞病變觀察及HAd檢查時，接種于每種指示細胞上的待測樣本至少接種3孔；進行熒光抗體檢測時，接種于每種指示細胞上的待測樣本進行每種病毒檢測時至少接種2孔。繼續(xù)培養(yǎng)至少至第21天，剩余細胞樣本－60℃或以下保存?zhèn)溆谩?/span>

（7）在第14天接種陽性對照病毒：取（5）制備的指示細胞接種適量陽性對照病毒，置36℃±1℃、5%CO2培養(yǎng)箱吸附2小時，吸棄上清液，加入適量細胞維持液，置36℃±1℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)7天，對于BT細胞，BVDV可作為病變陽性對照，BPI3可作為HAd陽性對照，牛副流感病毒3型（PI3）、牛腺病毒（BAV-3）、牛細小病毒（BPV）以及牛腹瀉病毒（BVDV）可作為IF檢測陽性對照；對于MDBK細胞，呼腸孤病毒3型（REO3）和PI3可分別作為細胞病變及HAd檢查陽性對照，PI3、BAV-3、BVDV、REO-3為IF檢測陽性對照；對于Vero細胞，Pl3可作為細胞病變及HAd檢查陽性對照，PI3及REO-3作為IF檢測陽性對照?？刹辉O立狂犬病病毒（Rabies）陽性對照。所有IF檢測陽性對照病毒應接種100～300CCID50。

（8）接種陰性對照及供試品的細胞培養(yǎng)物在接種后每日觀察細胞病變情況，在接種后至少21天或末次傳代后至少7天時分別進行病變觀察、HAd檢查及IF檢測，陽性對照培養(yǎng)物在接種后第7天或10%細胞出現(xiàn)CPE時可進行IF檢測。

進行血吸附檢查時，用雞與豚鼠血紅細胞在2～8℃及20～25℃進行檢測。

進行熒光抗體檢測時，將細胞固定后采用直接或間接免疫熒光抗體檢查法，至少應對BVDV、PI3、BAV-3、BPV、REO3以及 Rabies進行檢查，結(jié)果均應為陰性。

（9）結(jié)果判定　陰性對照應無細胞病變，血吸附檢查應為陰性，熒光抗體檢測應為陰性；陽性對照應有明顯的細胞病變，血吸附檢查應為陽性，熒光抗體檢測應為陽性，判為試驗成立。供試品如無細胞病變，血吸附檢查為陰性，且熒光抗體檢測為陰性，判定為符合要求。待測樣本如出現(xiàn)細胞病變，或血吸附檢查為陽性，或任何一種熒光抗體為陽性，則判定為不符合要求。

經(jīng)病毒滅活處理的牛血清，滅活前取樣檢測后若任何一項檢測顯示為陽性，不建議用于生產(chǎn)。除非可鑒別出污染的病毒，且病毒滅活工藝驗證研究顯示其污染量可被有效滅活時方可使用，如果滅活前BVDV病毒檢測為陽性，滅活后還應取樣采用敏感的方法檢測BVDV，結(jié)果陰性為符合要求。

未經(jīng)病毒滅活處理的牛血清若任何一項檢測顯示為陽性，則不得用于生產(chǎn)。

不能用感染試驗檢測的牛源性病毒可采用核酸檢測法，但應采用較大量的樣品提取核酸（如25～50ml的血清樣本），并計算合并血清的檢測限。