常規(guī)PCR法介紹

常規(guī)PCR法：是根據(jù)支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設(shè)計(jì)引物，對(duì)待檢樣本DNA進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的大小分析作出診斷。

優(yōu)點(diǎn)：①靈敏度高，特異性好。②時(shí)間短，2-3小時(shí)出結(jié)果。③符合歐洲藥典。④操作簡(jiǎn)單。

缺點(diǎn)：①對(duì)于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。（可用培養(yǎng)法做補(bǔ)充驗(yàn)證）。②不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大（由于引物及內(nèi)在設(shè)計(jì)不同），需謹(jǐn)慎選擇，盡量在專業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。

『支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒』介紹

德國(guó)MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒，依據(jù)操作步驟的細(xì)微差別，分一步法和經(jīng)典法兩類。此兩類試劑盒較其他廠家同類產(chǎn)品，具有以下的優(yōu)點(diǎn)：

①高特異性，270bp左右的一條陽(yáng)性對(duì)照條帶，涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果易于觀察。（使用MB的試劑盒，下表列出的支原體物種均為陽(yáng)性，其他微生物或真核細(xì)胞均為陰性。根據(jù)16s rRNA序列的同源性比對(duì)，該試劑盒可檢測(cè)出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體。）

②高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。

③試劑盒含內(nèi)控對(duì)照，可防止假陰性的發(fā)生。

④符合歐洲藥典要求。

適用范圍

<!--[if !supportLists]-->A. <!--[endif]-->科研用戶，細(xì)胞上清的篩查可選用MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒（一步法）。（詳見下文）

【Venor® Gem OneStep (貨號(hào):11-8050)】或【Venor® Gem Advance (貨號(hào): 11-7096)】

B. 對(duì)于需遵循藥典要求的生物制藥企業(yè)，可選用MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒（經(jīng)典法）。

【Venor® Gem Classic(貨號(hào): 11-1050) 】+ Taq酶 (貨號(hào): 53-1050)】

或【Venor® Gem Classic (貨號(hào): 11-1050G)】

特點(diǎn)

1. 內(nèi)控對(duì)照已加在預(yù)混液中，無(wú)需另外配置，使用便捷。

2.高特異性，僅一條陽(yáng)性對(duì)照條帶，即可涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種。

操作簡(jiǎn)單，易于觀察。

3.高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。

4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測(cè)出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體。

操作步驟

下列圖示以Venor® Gem OneStep支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒(一步法)( 貨號(hào)：11-8050) 為例，具體產(chǎn)品操作以說(shuō)明書為準(zhǔn)。

191bp為內(nèi)控對(duì)照條帶，表明PCR反應(yīng)正常。

當(dāng)樣本存在支原體污染時(shí)，由于內(nèi)控對(duì)照與支原體DNA存在競(jìng)爭(zhēng)，內(nèi)控對(duì)照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽(yáng)性對(duì)照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對(duì)照條帶會(huì)完QUAN消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測(cè)結(jié)果。

如果待測(cè)樣本對(duì)PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對(duì)照條帶變?nèi)酰ê完幮詫?duì)照相比），此時(shí)應(yīng)先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測(cè)。

儲(chǔ)存條件

2~8℃至少12個(gè)月。復(fù)溶后必須在-18℃保存。

效期

1年6個(gè)月

(締一生物)

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